الطريقة لاستخلاص جاما(γ) جلوبيولين.
إن قدره جهاز المناعة لمواجهة التحديات قد تم استخدامه في المختبر لإنتاج كميات كبيره من الأجسام المضاده بالاستعانة بحيوان مخبري، مثل الأرنب.
قبل البدأ بهذه التجربة ، يتم اكساب المناعة إلى حيوان (أرنب) بواسطة زلال بويضة دجاجه (OVA)،ويتم اخذ عينه الدم من الحيوان(الأرنب)، ثم يتم فصل المصل عن كريات الدم الحمراء، ومن هذا المصل يتم استخلاص الأجزاء التي تحتوي على الأجسام المضادة.
المصل يحتوي على عده أنواع من البروتينات. ومن هذا المصل سوف يتم عزل جزءان رئيسيان حسب ذائب يتهما في محلول 50% من أملاح كبريتات الامونيوم المشبع (NH4)2SO4 على حرارة مقدارها 4 درجات مئوية، أول جزء يحتوي على الجلوبيولين والذي يترسب في محلول 50% من أملاح كبريتات الامونيوم. أما الجزء الثاني فيحتوي على زلال المصلSERUM ALBUMIN) ) و ا لذي يبقى ذائب في محلول 50% من أملاح كبريتات الامونيوم المشبع.
هدف التجربة:.
استخلاص جزيئات الجلوبيولين المناعي الذي يحتوي على أجسام مضادة ل (OVA ) من مصل أرنب تم إكسابه مناعة معينه .
المواد:.
7.محلول أ. محلول كبريتات الامونيوم المشبع.
8.محلول ب. محلول 50% من أملاح كبريتات الامونيوم المشبع.
9.محلول الفوسفات الملحي المنظم (PBS ) .
10. 1, 5 مل من مصل أرنب تم إكسابه مناعة ضد(OVA) .
الطريقة:-
5. ضع 1 مل من المصل إلى أنبوب الاختبار.
6. بالتدريج قم بإضافة 1 مل من محلول كبريتات الامونيوم المشبع إلى (محلول أ).
بحذر شديد قم بعملية المزج حتى يظهر راسب أبيض ( المحلول الآن أصبح مشبع بنسبة 50%).
7. قم بوضع المحلول لمدة ساعتين على حرارة 4 درجات مئوية.
8. أضف 2 مل من محلول ب، ثم قم بفصل العينة بواسطة جهاز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق على سرعة 10000 لفة/ دقيقة.
9. قم بفصل الراسب عن السائل.
10. قم بإذابة السائل في غشاء ديليزي (DIALYSIS MEMBRANE) ثم اسمح للغشاء بالقيام بعملية الديلزه لزلال المصل البقري لمدة ساعتين.
11. قم بإخراج المحلول من الغشاء الديليزي و احفظه على حرارة مقدارها 4 درجات مئوية.
الخلاصة و المناقشة:-
5. في رأيك، أي الأجزاء تحتوي على بروتين زلال المصل؟
6. في رأيك، أي الأجزاء تحتوي على جاما(γ) جلوبيولين ؟
7. في رأيك، أي الأجزاء نحتوي على الأجسام المضادة؟
8. اقترح طريقة لفصل مضاد البويضة (OVA) الجلوبيوليني المناعي من مضاد (OVA) الأجسام المضادة؟
محلول ا- محلول كبريتات الامنيوم المشبع: أذب 75 غرام من كبريتات الامونيوم في 100 مل ماء، قم بعملية التسخين المستمر، مع القيام بتعديل درجة الحموضة إلى 7.0.
محلول ب- قم بإضافة 5 مل من محلول كبريتات الامونيوم المشبع بالتدريج.
