معايرة الأجسام المضادة بتقدير كمي باستعمال طريقة ELISA (اختيار الطرق المناعية الأنزيمية)

طريقة ELISA (اختيار الطرق المناعية الأنزيمية) هي الطريقة التي تسمح لنا بتحديد هوية وكمية الكثير من المواد في سوائل الجسم واغشيته ، هذه الطريقة يمكن استخدامها للكشف عن الهرمونات ، الأنزيمات ، الفيروسات ، البكتيريا ، المواد السامة ، الطفيليات ، العلامات المرتبطة بالسرطان على الخلايا  المستحضرات الصيدلية ..الخ .

هذه الطريقة تستخدم أيضا للكشف عن أجسام مضادة موجهه ضد كائنات دقيقة أو أجسام مضادة للمناعة الذاتية، تجرى  طريقة ELISA على طبق بلاستيكي .

 الكشف عن الأجسام  المضادة في مصل دم : وذلك باستخدام أبار تكون موجودة ضمن طبق يحتوي على 96 بئر بلاستيكي مغطاة بمولد الضد الخاص ( البوليسترين الذي يستطيع إن يربط بشكل غير محدد بالبروتينات ). المصل يضاف إلى الآبار المغطاة بمولد الضد , الأجسام المضادة الخاصة بمولد الضد الذي يغطي الآبار التي ترتبط به ،أما بقيه الأجسام المضادة الموجودة في المصل فتزال خلال عملية غسل الآبار المتكررة . هذه العملية نوعا ما معقدة . ولكن يمكن تقسيمها إلى أربعة خطوات :-

1-   طلاء الآبار : يوضع مولد الضد في الآبار الواقعة داخل الطبق وهكذا يرتبط مولد الضد على الآبار البلاستيكية ، يتم وضع كمية إضافية من مولد الضد لضمان إن جميع مواقع الربط على البئر مرتبطة بمولد الضد ، ويضاف بروتين أخرBSA  زلال مصل بقري، مع مولد الضد وذلك لضمان عدم وجود موقع ربط فارغ .

2-   إضافة المصل : يضاف المصل إلى كل بئر بطريقة التخفيف المتسلسل ( مثلا 1:10 ,1:20 ,1:40 , 1:80) ثم يترك في البئر الأجسام الخاصة في المصل ( الأجسام المضادة الأولية ) ترتبط مع مولد الضد المربوط على الطبق ، بعد القيام بعملية غسل الطبق تبقى الأجسام المضادة المربوطة بمولد الضد فقط في الآبار .

3-   إضافة الأجسام المضادة الثانوية : الأجسام المضادة الثانوية تضاف إلى الآبار ، هذه الجسام المضادة تتعرف على منطقة FC الموجودة على الأجسام المضادة الأولية حيث ترتبط عليها ، الأجسام المضادة الثانوية يجب إن تفقد القدرة على ربط مولد الضد ، ويجب إن يكون مربوط بأنزيم ( مثل البروكسيداز ) قبل البدأ ، إن الهدف من هذا الأنزيم هو عمل تفاعل يقوم بإنتاج لون معين .

التفاعل اللوني : في هذه المرحلة يضاف إلى الآبار مادة متفاعلة خاصة بالأنزيم المربوط إلى الأجسام المضادة الثانوية ، التفاعل بين الأنزيم و المادة المتفاعلة يقوم بإحداث تغير في لون المحلول الموجود بالبئر وهذا الغير يمكن قياسه.

      في هذه المرحلة يجب معرفة :-

أ‌.       لماذا لا ترتبط  الأجسام المضادة الثانوية بالبلاستك أو بمولد الضد ؟

ب‌.  تعتمد كمية الأجسام المضادة الثانوية الموجودة في البئر على كمية الأجسام المضادة الأولية المربوطة بمولد الضد .

ج. شدة اللون تتناسب مع كمية الأجسام المضادة الأولية المربوطة بمولد الضد .

المعيار للأجسام المضادة عكس أخر تخفيف حيث إن تغير في اللون يمكن إن يكشف المعيار  الحجمي الأجسام المضادة في البئر يرتفع عند ارتفاع تركيز الأجسام المضادة في المصل .

 سؤال :

ما هي الفائدة من استخدام الأجسام المضادة الثانوية ؟

عند تخفيف الأجسام المضادة الاوليه فان شدة اللون تقل وعند الوصول إلى درجة التخفيف المعينة سوف يختفي اللون في التفاعل،